MCF-7(人乳腺癌細(xì)胞)培養(yǎng)建議

細(xì)胞介紹

英文名稱：MCF-7

中文名稱：人乳腺癌細(xì)胞

種  屬：人源

組織來源：乳腺，乳房；源自轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)（胰酶會(huì)刺激分化）

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代比例：1:2 ~ 1:3

換液頻率：2~3次/周

倍增時(shí)間：30-72h

培養(yǎng)體系：MEM（含NEAA）+10% Bio-channel特級(jí)胎牛血清+1% P/S

培養(yǎng)條件：5% CO2 ；37 ℃

凍存條件：Biochannel 細(xì)胞凍存液，程序降溫，液氮長(zhǎng)期保存。




培養(yǎng)建議


細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)

1. MCF-7細(xì)胞一般情況下是生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系，前期呈島狀生長(zhǎng)，隨著細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞會(huì)逐步變成扁平單層細(xì)胞。通常需要6~12天才能達(dá)到80%生長(zhǎng)密度，如果生長(zhǎng)速度比正常情況還要緩慢，可能需要換另外批次的血清，把血清濃度提高到20%也有助于改善細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

2. 細(xì)胞在復(fù)蘇和傳代后，會(huì)在培養(yǎng)基中觀察到成團(tuán)的細(xì)胞漂浮物，對(duì)于這個(gè)細(xì)胞來說這是正常的情況，在復(fù)蘇和傳代后前三天可以靜置細(xì)胞不做處理，三天后貼壁情況會(huì)有所改善，但懸浮的細(xì)胞團(tuán)仍會(huì)出現(xiàn)，這些懸浮的細(xì)胞是活細(xì)胞在換液和傳代時(shí)需要離心回收，這些懸浮細(xì)胞團(tuán)可以通過使用移液器（5mL或者更小）來吹散，重新打入到貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。丟棄這些懸浮細(xì)胞會(huì)使細(xì)胞密度變低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。

3. 使用BC-CE-005   胰酶-EDTA消化液（0.25%胰酶，含酚紅） 消化細(xì)胞。

4. 細(xì)胞消化較快，室溫消化即可；消化時(shí)不要通過敲擊或搖晃培養(yǎng)瓶來攪動(dòng)細(xì)胞，以免形成細(xì)胞團(tuán)。




細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 建議加入胰島素培養(yǎng)；

2. MCF-7細(xì)胞細(xì)胞貼壁較慢，處理后48h后再觀察較好。MCF-7剛復(fù)蘇時(shí)長(zhǎng)得很慢很慢，主要看貼壁的細(xì)胞是不是已經(jīng)舒展開來（三角形或多邊形），其次，看貼壁細(xì)胞是否開始分裂，形成一個(gè)一個(gè)的細(xì)胞群（MCF-7具上皮細(xì)胞的性質(zhì)）。如果開始增殖，就是好現(xiàn)象?；謴?fù)后，會(huì)長(zhǎng)得快一點(diǎn)，但和其他的乳腺癌細(xì)胞沒得比，還是不快，傳代時(shí)比例不要太大。還有，這個(gè)細(xì)胞恢復(fù)時(shí)貼壁比較慢，但貼得很牢，消化時(shí)胰酶處理要適合，免得大量的細(xì)胞仍在皿上不下來。

3. 要注意MCF-7人乳腺癌細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)規(guī)律性差，很容易不均勻，要注意吹打的充分性。


MCF-7細(xì)胞特點(diǎn)

1. 成團(tuán)簇的形式生長(zhǎng)；

2. 由于MCF-7細(xì)胞是三維團(tuán)簇的方式生長(zhǎng)，復(fù)蘇和傳代后會(huì)重新附著為三維島（會(huì)有一些不會(huì)重新附著的簇）。生長(zhǎng)最終會(huì)從島嶼狀慢慢擴(kuò)散開來，隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞會(huì)緩慢變成單層，這個(gè)時(shí)候細(xì)胞基本處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

3. MCF-7人乳腺癌細(xì)胞是一種本身生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至細(xì)胞 70~80% 的匯合度，即可進(jìn)行分瓶處理，一般T25培養(yǎng)瓶建議1:2傳代，每周可傳代2~3次，如果細(xì)胞生長(zhǎng)速度比正常的時(shí)候更慢，可以適當(dāng)提高血清到20%有利于促進(jìn)生長(zhǎng)。

4. MCF-7細(xì)胞在復(fù)蘇、傳代后，細(xì)胞會(huì)有一些漂浮狀態(tài)，這些漂浮細(xì)胞是正常現(xiàn)象，可以視為混合的貼壁和懸浮細(xì)胞系。一般復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)3天后漂浮細(xì)胞會(huì)再繼續(xù)粘附貼壁。直到生長(zhǎng)從島嶼擴(kuò)散開來并且在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)伸展開，通常在進(jìn)行換液的時(shí)候我們會(huì)補(bǔ)加培養(yǎng)基，如果一定要全換液，可以通過離心收集懸浮細(xì)胞以1000轉(zhuǎn)5min，并將懸浮細(xì)胞接種到新培養(yǎng)瓶。

5. MCF-7細(xì)胞密度低時(shí)，生長(zhǎng)緩慢，接種密度建議啟動(dòng)接種密度：8.0×104至 1.5×105 活細(xì)胞/cm2為宜，繼代培養(yǎng)的接種密度：4.0 ×104至 1.0×105 活細(xì)胞/cm2。


常見問題

Q: 收貨時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

A：受到運(yùn)輸影響，懸浮細(xì)胞會(huì)短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常。一些細(xì)胞在運(yùn)輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。


Q：培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%，說明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。


Q：培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？

A：少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，會(huì)自己分散開。


Q：培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。


Q：鏡下觀察時(shí)，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A：懸浮細(xì)胞會(huì)隨著液體流動(dòng)，不容易聚焦，靜置5-10min使細(xì)胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度。