熱滅清的原因

  加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng).的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅清。

  有無(wú)必要做熱滅活

  實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的.經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低.而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

  因此建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步.如此一來(lái)，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

  怎樣避免產(chǎn)生沉淀物

  建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作:

  解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物:

  § 解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生;

  § 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量;

  § 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟;

  § 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

  → 關(guān)于血清保存凍融要點(diǎn)

  1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃冰箱;

  2)4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月;

  3)由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，血清在凍入低溫冰箱前必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽?

  4)我公司提供的血清一般為無(wú)菌，因此不用再過(guò)濾除菌;

  5)如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾，不能直接過(guò)濾血清;

  6)血清解凍時(shí)需采用逐步解凍法，從低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室溫待全部溶解后再分裝;

  7)在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻，注意不要產(chǎn)生氣泡，不要產(chǎn)生沉淀;

  8)不能直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀;

  9)血清滅活是指56℃加熱 30分鐘處理已完全解凍的血清，加熱過(guò)程中應(yīng)該搖晃均勻。使血清中的補(bǔ)體成分滅活;

  10)除非必須，商品化血清不需要滅活處理，熱處理會(huì)造成血清沉淀物增多;

  11)不能將血清在37℃放置超過(guò)2天，血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)降解血清中的有效成分;

  12)血清中的沉淀絮狀物主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清質(zhì)量，3000rpm離心 5分鐘即可去除;

  13)顯微鏡下小黑點(diǎn)是由于經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清，沉淀物的形成會(huì)增多，有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點(diǎn)，常誤認(rèn)為血清受污染;

  14)通常，黑點(diǎn)不多時(shí)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。