SH-SY5Y(人神經(jīng)母細胞瘤細胞)培養(yǎng)建議

細胞介紹

英文名稱：SH-SY5Y

中文名稱：人神經(jīng)母細胞瘤細胞

種    屬：人源

組織來源：腦神經(jīng)母細胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓

生長特性：半貼壁半懸浮生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代比例：1:2 ~ 1:4

換液頻率：2~3次/周

倍增時間：48-72h

培養(yǎng)體系：MEM/F12（或DMEM/F12）+15%FBS+1%P/S

培養(yǎng)條件：5% CO2 ；37 ℃

凍存條件：Biochannel 細胞凍存液，程序降溫，液氮長期保存。

培養(yǎng)建議

一、細胞培養(yǎng)特點

1. 貼壁弱，消化時間短，注意控制消化時間；

2. 細胞傳代容易成團聚集，可以通過控制細胞密度不超過80%，當(dāng)密度到達或超過80%及時傳代，傳代時切勿用力吹打，避免對細胞造成機械刺激，同時注意盡量吹散細胞；

3. 細胞生長偏慢，注意控制細胞密度不要過低；細胞密度過高時及時傳代，避免培養(yǎng)基變黃導(dǎo)致細胞脫落或者狀態(tài)變差。

二、細胞培養(yǎng)注意事項

1. MEM/F12以及DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y細胞，但不同培養(yǎng)基培養(yǎng)之后會有部分形態(tài)差異；

2. SH-SY5Y細胞是成簇生長，飽和度高，其表現(xiàn)會是鏡下觀察密度低，但每團細胞簇密度大，可以根據(jù)培養(yǎng)基顏色進行換液；

三、細胞特點

1. 成團簇的形式生長

2. 由于SH-SY5Y細胞是三維團簇的方式生長，復(fù)蘇和傳代后會重新附著為三維島（會有一些不會重新附著的簇）。生長最終會從島嶼狀慢慢擴散開來，隨著時間的推移，細胞會緩慢變成單層，這個時候細胞基本處于對數(shù)生長期。

3. SH-SY5Y細胞是一種本身生長緩慢的細胞，當(dāng)細胞培養(yǎng)至細胞 70~80% 的匯合度，即可進行分瓶處理，一般T25培養(yǎng)瓶建議1:2傳代，每周可傳代2~3次，如果細胞生長速度比正常的時候更慢，可以適當(dāng)提高血清到20%有利于促進生長。

4. SH-SY5Y細胞在復(fù)蘇、傳代后，細胞會有一些漂浮狀態(tài)，這些漂浮細胞是正?，F(xiàn)象，可以視為混合的貼壁和懸浮細胞系。一般復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)3天后漂浮細胞會再繼續(xù)粘附貼壁。直到生長從島嶼擴散開來并且在培養(yǎng)瓶內(nèi)伸展開，通常在進行換液的時候我們會補加培養(yǎng)基，如果一定要全換液，可以通過離心收集懸浮細胞以1000轉(zhuǎn)5min，并將懸浮細胞接種到新培養(yǎng)瓶。

5. SH-SY5Y細胞密度低時，生長緩慢，接種密度建議啟動接種密度：8.0×104至 1.5× 105活細胞/cm2為宜，繼代培養(yǎng)的接種密度：4.0 × 104至 1.0×105 活細胞/cm2。

常見問題

Q: 收貨時細胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

A：受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常。一些細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

Q：培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

Q：培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

A：少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

Q：培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對THP-1細胞的影響。當(dāng)細胞密度過大但需要維持時，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。

Q：鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A：懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10min使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。